Morphoquantitative study of Rattus norvegicus submucosal plexus by different neuronal evidentiation histochemical techniques / Estudio morfocuantitativo del plexo submucoso de Rattus norvegicus por medio de diferentes técnicas histoquímicas para verificar características neuronales

Enteric nervous plexuses have been the object of several studies, specially the myenteric plexus whose studies describe its organization, functions and alterations. On the other hand, the submucosal plexus has been less studied and still needs descriptive studies. To analyze morphologically and quantitatively submucosal neurons of the jejunum of 90-day-old healthy rats using different techniques for neuronal staining as a way to provide normality data to compare with future experimental studies. Whole mount preparations of the jejunum were submitted to Giemsa, NADH-diaphorase and NADPH-diaphorase techniques to stain the total neuronal population, more metabolically active subpopulation and subpopulation of nitrergic neurons, respectively. Neurons of the submucosal plexus of adult rats are mainly organized in ganglia with varied sized and shapes. Giemsa technique stained 243.93 ± 7.68 neurons per mm2. Regarding the total population stained by Giemsa, NADH- diaphorase positive (139.09 ± 11.14/mm2) neurons represented 57 % and NADPH-diaphorase positive (18.17 ± 0.28/mm2) represented 7.5 %. The area of the cell body was bigger in nitrergic neurons (412.29 ± 150.22) than in the ones stained by Giemsa (254.71 ± 63.32) and NADH-diaphorase positive (243.98 ± 123.82).

El plexo nervioso entérico ha sido objeto de varios estudios, especialmente el plexo mientérico, cuyos estudios consisten en describir su organización, funciones y alteraciones. Por otro lado, el plexo submucoso ha sido menos investigado y todavía necesita estudios descriptivos. Para analizar morfológica y cuantitativamente las neuronas de la submucosa del yeyuno de ratas de 90 días de edad, se realizaron diferentes técnicas de tinción neuronales, en animales sanos, como una forma de proporcionar datos de normalidad y compararlo con futuros estudios experimentales. Se realizaron montajes con preparados enteros del yeyuno que fueron sometidos a las técnicas de Giemsa, de NADPH-diaforasa y NADH-diaforasa para teñir la población total neuronal, subpoblación más activa metabólicamente y subpoblación de neuronas nitrérgicas, respectivamente. Las neuronas del plexo submucoso de ratas adultas se organizan principalmente en los ganglios con variaciones de tamaño y formas. Con la técnica de Giemsa se tiñeron 243.93±7.68 neuronas por mm2. Con respecto a la población total teñida con Giemsa, fueron positivas para NADH- diaforasa en 139.09 ±11.14 / mm2 neuronas, representando el 57% y fueron positivas para NADPH-diaforasa en 18,17 ± 0,28 / mm2 neuronas, lo que representó el 7,5%. El área del cuerpo celular fue mayor en neuronas nitrérgicas (412,29 ± 150.22) que en las teñidas con Giemsa (254,71 ± 63,32) y NADH-diaforasa positivas (243,98 ± 123,82).

Efeito da atividade física moderada sobre neurônios mioentéricos nitrérgicos do íleo de ratos de meia idade / The effect of moderate physical activity on myoenteric nitrergic neurons in the ileum of middle-aged rats / Efecto de la actividad física moderada en neuronas mientéricas nitrérgicas del íleon de ratas de mediana edad

Poucos são os relatos a respeito do efeito da atividade física sobre o plexo mioentérico ao longo do envelhecimento. Portanto, analisaram-se os neurônios mioentéricos NADPH-diaforase positivos do íleo em ratos que envelheceram praticando atividade física a partir dos seis meses de vida. Dez ratos Wistar foram distribuídos em dois grupos (n = 5/grupo): S (ratos sedentários controles com 12 meses de idade) e T (ratos treinados com 12 meses de idade). Os animais do grupo T realizaram, dos seis aos 12 meses de idade, atividade física regulada conforme resultados obtidos em teste de esforço máximo. Ao final do período experimental, o íleo obtido de cada animal foi processado para a técnica de NADPH-diaforase para evidenciar neurônios mioentéricos em preparados de membrana e quantificar e mensurar a área do pericário desses neurônios. A área do pericário não diferiu (P> 0,05) entre o grupo S (218,49 µm2) e o grupo T (210,59 µm2). A média de neurônios presente em 60 campos microscópicos de preparados de membranas no grupo S (126 neurônios) foi superior (P<0,05) a média encontrada no grupo T (93 neurônios), sugerindo que a atividade física pode inibir ou diminuir a expressão dos neurônios nitrérgicos em ratos de 12 meses de idade que praticaram atividade física desde os seis meses de vida. Os resultados quantitativos sugerem que a falta de atividade física regular propicia aumento na atividade dos neurônios nitrérgicos, contribuindo para o surgimento dos distúrbios da motricidade gastrointestinal que podem ocorrer ao longo do envelhecimento.

There are only a few reports on the effect of physical activity in the myoenteric plexus throughout the aging process. For such, the positive myoenteric NADPH-diaphoresis neurons in the ileum of those rats that aged practicing physical activity from the sixth month were analyzed. Ten Wistar rats were distributed into two groups (n= 5/group): S (12 months-old control sedentary rats) and T (12 months-old trained rats). The animals from the T group practiced controlled physical activity from the age of 6 months to 12 months, according to the maximum effort test results. At the end of the experimental period, the ileum obtained from each animal was processed in the NADPH-diaphoresis technique to highlight myoenteric neurons in membrane preparations, and quantify and measure the perikaryon area from those neurons. The Perikaryon area did not differ (P>0.05) among the S group (218.49 µm2) and the T group (210.59 µm2). The average of neurons in 60 membrane preparations in the S group (126 neurons) was higher (P<0.05) than the average finding in the T group (93 neurons), indicating that the physical activity can inhibit or decrease the nitrergic expression in 12 month-old rats that have practiced physical activity from the age of 6 months. The quantitative results suggest that the lack of regular physical activity provides the elevation of nitrergic neurons, concurring to the emergence of gastrointestinal motility disorders that can occur during the aging process.

Hay pocos informes sobre el efecto de la actividad física sobre el plexo mientérico a lo largo del envejecimiento. Por lo tanto, se analizaron las neuronas mientéricas NADPH-diaforasa positivas del íleon en ratas que envejecieron practicando actividad física a partir de seis meses de vida. Diez ratas Wistar se dividieron en dos grupos (n = 5 / grupo): S (ratas sedentarias de control con 12 meses de edad) y T (ratas entrenadas con 12 meses de edad). Los animales del grupo T realizaron, de los seis a los doce meses de edad, actividad física regulada conforme resultados obtenidos en prueba de esfuerzo máximo. Al final del período experimental, el íleon obtenido de cada animal se procesó por la técnica de NADPH-diaforasa para mostrar las neuronas mientéricas en preparados de membrana, cuantificar y medir el área del pericario de esas neuronas. El área del pericario no difirió (P> 0.05) entre el grupo S (218.49 µm2) y el grupo T (210.59 µm2). El número medio de neuronas presentes en 60 campos microscópicos de preparados de membranas en el grupo S (126 neuronas) fue mayor (P <0,05), promedio encontrado en el grupo T (93 neuronas), lo que sugiere que la actividad física puede inhibir o disminuir la expresión de las neuronas nitrérgicas en ratas de 12 meses de edad que practicaron actividad física desde los seis meses de edad. Los resultados cuantitativos sugieren que la falta de actividad física regular promueve aumento en la actividad de las neuronas nitrérgicas, contribuyendo a la aparición de disturbios de la motricidad gastrointestinal que pueden ocurrir a lo largo del envejecimiento.